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二 Western Blot 检测服务

蛋白免疫印迹(Western blotting 或 Immunoblotting)一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测三个部分组成。第一步是做SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳,使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。第二步把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到硝酸纤维素膜(NC 膜)或者PVDF 膜。第三步是用特异性的抗体检测出已经印迹在膜上的所要研究的相应抗原。免疫检测的方法采用间接免疫酶标的方法,在用特异性的第一抗体杂交结合后,再用酶标的第二抗体杂交结合,再加酶的底物显色或者通过膜上的颜色或X 光底片上暴光的条带来显示抗原的存在。

基本操作流程:

提取细胞或组织蛋白、测定大致含量

制备SDS-PAGE胶

蛋白样品变性、电泳

电泳转膜

封闭

一抗

TBST洗涤

HRP标记的二抗

TBST洗涤

ECL试剂作用

X-光片曝光、显影


    结果分析

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