联系我们|网站地图|English
中心动态

您现在的位置:首页技术服务六 蛋白表达与纯化实验技术服务

六 蛋白表达与纯化实验技术服务

一. 目标基因全基因合成:
    1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因,我们免费提供给客户。
    2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化,密码子优化。
    3. 合成设计好的基因序列。

    二. 目标基因亚克隆:
    1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
    2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
    3. 测序验证构建质粒的准确性。
    4. 提供如下表达载体:提供给客户:正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。

    三. E.coli表达菌株转化及筛选:
    1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
    2. 将表达质粒转化到高效的E.Coli表达菌株中。
    3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
    4. SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况,并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
    5. 可提供表达菌株:DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
    提供给客户:重组质粒的表达菌株及表达检测报告。

    四. 目标蛋白表达及纯化:
    1. 摇瓶培养1L重组细菌,诱导表达目标蛋白。
    2. 通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
    3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签,再纯化获得所需的目标蛋白(可选,构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点)。
    4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
    5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

联系我们|网站地图|友情链接|法律声明