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高通量定量抗体芯片技术平台
[2012-5-22]

定量抗体芯片平台

    定量抗体芯片利用多个夹心ELISA法的原理同时进行定量检测的系统。它结合了ELISA法高特异性、高灵敏度和芯片高通量的优势。通过在玻璃片上固定多个特异性捕获抗体,一次实验可定量检测240多个蛋白,检测样品体积仅需50-100 μL。将梯度稀释的标准品和未知样品在一块玻片上一起处理。利用荧光素作为检测信号,通过比较未知样品和标准曲线的信号,来确定样品中的未知因子的浓度。定量芯片的结果具有一致性和可靠性,且节省时间和样品量。

定量抗体芯片试剂盒组成

· l 定量芯片---Quantibody®Array Glass Chip

· l 样品稀释---Sample Dilent

· l 1500×荧光标记链霉亲和素­­---Cy3 equivalent dye-conjugated Strepavidin,1管

· l 2X封闭缓冲液---(Blocking Buffer 10ml)

· l 20X洗液I ---(20X Wash Buffer I,30 ml)

· l 20X洗液II---(20X Wash Buffer II, 30 ml)

· l 标准品---(standard mix, 1管)

· l 检测抗体---(Dectection antibody cocktail)

· l 玻片芯片配件--(玻片框架、垫圈、搭扣边、密封条)

· 30ml管---(tube)

· l 操作手册

结果扫描

荧光信号采用激光扫描仪进行扫描,除了常用的GenePix的激光扫描仪以外,有十几个品牌的不同型号都可使用玻片式抗体芯片,仪器型号详见蛋白芯片技术小册子激光扫描仪推荐。

· 玻片标准大小:25 mm x 75 mm

· 玻片厚度:1 mm

· 检测方向:芯片正面朝向光线和检测器

· 扫描区域:22 mm x 73 mm

· 对焦:自动对焦或可调(+/- 200 μm)

· 激发光线:Cy3 (绿光) 532 nm通道

· 分辨率:≤20 μm

· 动态范围:>103

检测图片输出:16-bit TIFF格式图片

    数据分析
    一条玻片芯片有16个孔,可选取6个或8个孔做标准曲线,剩下8个或10个孔用于样品检测。将标准品蛋白进行梯度稀释后加入孔中,然后加入检测抗体混合液,通过已知浓度的标准品蛋白作出各个检测指标的标准曲线。标准曲线可以选用直线方程,也可选用log-log方程。使用分析软件,只需通过仪器读取各点荧光值,将数值导入分析软件,便可以直接得出标准曲线,方便快捷。


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